葛敬恩出身商販家庭，於1904年考入浙江武備學堂，畢業後擔任陸軍小學堂教官、督練公所科員等，曾加入光復會及同盟會。辛亥革命期間，葛敬恩參加浙江新軍的起事，又參加南京之役，並被任命為兵站交通部長、南北議和隨員。民國成立後，葛敬恩進入陸軍大學正則班第四期就讀，畢業後赴日本陸軍大學深造，於1921年畢業。葛敬恩畢業返國後於浙軍任職，1924年時升任浙軍第一師參謀長（師長陳儀）。北伐期間，葛敬恩隨陳儀響應國民革命軍，並調任第十九軍副軍長、總司令部參謀處長等。
北伐結束後，葛敬恩出任編遣委員會總務部副主任、主任；1930年時出任青島市長，在中原大戰後歷任參謀次長、軍委會第一廳副廳長、軍委會航空署長等。1934年，葛敬恩調任浙江省政府委員，但因貪汙而去職，後閒居上海。抗戰期間，葛敬恩曾加入汪兆銘政府，但在抗戰後期又回到國民政府。戰後，葛敬恩隨陳儀赴臺灣，就任行政長官公署秘書長，但在任期間官聲不佳，二二八事件後被調回大陸，任立法委員。國共內戰後期，葛敬恩於1949年投共，晚年加入中國國民黨革命委員會（民革）。1979年10月10日，葛敬恩在上海病逝。